Modelli preclinici per lo studio di malattie immuno-metaboliche

Descrizione

Studio dei meccanismi coinvolti in patologie immuno-metaboliche su modelli preclinici (tessuti/cellule o su animali) per testare nuovi farmaci al fine di verificare la presenza di tossicità o di potenziali effetti terapeutici, e per poter eventualmente testare i trattamenti successivamente sull’uomo. L’obiettivo è testare nuove molecole per lo studio dei meccanismi d’azione e le possibili sinergie terapeutiche in patologie di forte impatto immuno-metabolico, incluse diabete, obesità. I protocolli e le tecniche a disposizione riguardano principalmente - sull'analisi dell'espressione di marcatori cellulari e molecolari mediante tecniche di biologia molecolare come RT-qPCR, dd-qPCR, test Elisa, Western Blot -modelli in vitro: le colture cellulari su singolo strato e in 3D -modelli ex vivo: organi isolati e perfusi -modelli in vivo: animali da esperimento (topi transgenici e/o con induzione di modelli di malattia) -analisi Citofluorimetrica per la valutazione in vitro degli effetti di farmaci, citochine o composti di varia natura su cellule di diversa origine e per caratterizzare fenotipicamente le popolazioni isolate e/o eventuali popolazioni cellulari circolanti nel sangue periferico umano o di animali da laboratorio. Il gruppo di ricerca ha esperienza multidisciplinare (certificata da numerose pubblicazioni su riviste scientifiche internazionali) e spesso utilizza approcci integrati che si servono di modelli sperimentali molto diversi e con funzioni complementari.

Responsabile

Nome	E-mail	Struttura
Mary Anna Venneri	maryanna.venneri@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI MEDICINA SPERIMENTALE

Personale docente e di ricerca

Nome	E-mail	Struttura
Federica Campolo	federica.campolo@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI MEDICINA SPERIMENTALE
Anisa Degjoni	anisa.degjoni@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI MEDICINA SPERIMENTALE
Maria Di Feola	mariairene.difeola@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI NEUROSCIENZE UMANE
Valeria Hasenmajer	valeria.hasenmajer@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI MEDICINA SPERIMENTALE
Emilia Sbardella	emi.sbardella@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI MEDICINA SPERIMENTALE
Francesca Sciarra	francesca.sciarra@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI MEDICINA SPERIMENTALE

Personale tecnico TAB

Nome	E-mail	Struttura
Flavio Rizzo	flavio.rizzo@uniroma1.it	DIPARTIMENTO DI MEDICINA SPERIMENTALE

Strumenti e attrezzature

Nome	Descrizione	Servizi offerti
CFX CONNECT OPTICS MODULE REAL-TIME SYSTEM BIORAD	Real Time PCR	Il sistema di rilevamento PCR in tempo reale CFX Connect offre analisi a due target, eccellenti specifiche del termociclatore e le stesse prestazioni affidabili del sistema di rilevamento PCR in tempo reale CFX96 Touch. Il sistema incorpora tecnologie ottiche innovative con un potente software per fornire la massima affidabilità ed efficienza per tutte le tue esigenze di PCR in tempo reale.
CYTOFLEX S BECKMAN COULTER	Citofluorimetro	La serie di citofluorimetri CytoFLEX S con 4 laser Violet-Blue-Yellow Green-Red (VBYR) con ilmodulo opzionale caricatore di piastre. Il sistema fluidico non –pressurizzato che permette di analisi di monociti circolanti, cellule NK, linfociti e piastrine per valutare lo stato infiammatorio, la funzione endoteliale e coagulativa della popolazione di pazienti affetti diverse patologie. Il sistema multi-parametrico (4 laser con 13 fluorescenze) permette di combinare la classica analisi citofluorimetrica di rilevazione di proteine di superficie e non, con metodiche innovative (Affymetrix), al fine di studiare l’mRNA e l’espressione proteica all’interno della singola cellula (single cells mRNA analysis). Il CITOFLEX-S fornisce 7 decadi di risoluzione, 24 bit; 16.777.216 canali di risoluzione e una velocità di acquisizione di 30.000 eventi/sec. Queste specifiche tecniche consentono un'eccellente separazione tra le popolazioni, e la separazione di popolazioni con simile segnale di fluorescenza. Vengono acquisiti campioni a partire da 10μL consentendo comunque un alto grado di flessibilità. Il campionamento a volume noto/calibrato consente di eseguire la conta assoluta delle cellule, senza l'obbligo di utilizzare prodotti basati su sfere di riferimento. Inoltre per un precisa analisi delle popolazioni si richiede la necessità di una altra sensibilità dello strumento. Il CITOFLEX-S ha una altissima sensibilità: <30 MESF-FITC, <10 MESF PE che offre un incremento nell’accuratezza dell’identificazione della popolazione e ha una misurazione del side scatter del laser violetto 405 nm che consente un miglioramento nella rilevazione di micro particelle fino a 0.2 micron (es piastrine e microvescicole), attraverso l’acquisizione contemporanea dell’SSC da 488 e da 405nm. Inoltre con l’innovativo modulo Wavelength Division Multiplexing (WDM) con rilevatori a stato solido, ad alta efficienza, a basso rumore di fondo offre un sistema di rilevamento flessibile che permette la facile configurazione delle ottiche.
LIEBHERR PROFILINE	Frigorifero -20°C	Congelamento campioni o reagenti
CROCODILE BERTHOLD	Lettura piastre ELISA	Il Crocodile 5-in-one è una workstation ELISA che offre le stesse funzionalità di cinque singoli strumenti in un ingombro simile a un lettore autonomo. L'uso di Crocodile riduce i tempi di analisi eliminando la necessità di spostare le piastre tra dispenser, lavaggio, incubatore, agitatore e lettore. Le funzionalità includono: - Dispenser - Shaker - Incubatore - Lavaggio - Lettore Lo strumento si adatta a qualsiasi test su piastra da 96 pozzetti ed il punto di forza è la sua versatilità. Può essere utilizzato come processore di analisi potente e flessibile, offrendo prestazioni automatizzabili. A differenza di altre workstation ELISA sul mercato, Crocodile può eseguire test che richiedono di sigillare la piastra durante alcune incubazioni. Esiste totale flessibilità nella selezione della lunghezza d'onda, i filtri preinstallati per ELISA sono 405, 450, 492 e 620 nm e sono disponibili 4 posizioni aggiuntive per filtri personalizzati.
QX 200 Droplet Digital PCR	Digital PCR	La Droplet Digital PCR (ddPCR) è un metodo per eseguire la PCR basato sulla tecnologia delle gocce di emulsione acqua-olio. Il campione viene frazionato in 20.000 goccioline e l'amplificazione delle molecole target avviene in ogni singola gocciolina. La tecnologia ddPCR consiste in una PCR ad alta produttività che utilizza volumi di campioni e reagenti inferiori e riduce i costi complessivi rispetto ad altri metodi, pur mantenendo la sensibilità e la precisione che sono le caratteristiche della PCR digitale. I vantaggi della tecnologia ddPCR includono: • Quantificazione assoluta: la tecnologia ddPCR fornisce un conteggio assoluto delle copie del DNA target per campione senza la necessità di eseguire curve standard, rendendo questa tecnica ideale per le misurazioni del DNA target, l'analisi della carica virale e la quantificazione microbica. • Precisione senza precedenti: la ripartizione del campione in gocce consente la misurazione affidabile di piccole differenze nel numero di copie della sequenza del DNA target tra i campioni. • Aumento del rapporto segnale-rumore, consentendo il rilevamento sensibile di target rari e consentendo una precisione di ±10% nella quantificazione. • I tassi di errore vengono ridotti rimuovendo la dipendenza dall'efficienza di amplificazione della qPCR, consentendo il rilevamento di piccole differenze (1,2 volte). • Quantificazione semplificata: per la quantificazione assoluta non sono richiesti né standard di calibrazione né un riferimento (il metodo ΔΔCq). • Costi ridotti dei materiali di consumo: i volumi di reazione sono compresi tra pico e nanolitri, riducendo l'uso di reagenti e la quantità di campione richiesta. • Costi delle apparecchiature inferiori: il sistema di reazione basato su emulsione significa che le reazioni PCR possono essere eseguite in un termociclatore standard senza chip complessi o microfluidica. • Partizionamento superiore: la tecnologia ddPCR produce 20.000 goccioline per 20 µl di campione, quasi due milioni di reazioni PCR partizionate in una piastra da 96 pozzetti, mentre i sistemi PCR digitali basati su chip producono solo centinaia o migliaia di partizioni. Il maggior numero di partizioni produce una maggiore precisione.
C1000 TOUCH THERMAL CYCLER BIORAD	PCR	Amplificazione molecole di DNA
HAIER BIOMEDICAL ULTRA LOW TEMPERATURE FREEZER	Frigorifero -80°C	Corservazione di campioni
EPPENDORF CENTRIFUGE 5810 R	Centrifuga per piastre e provette da 1,5ml	Centrifugazione di campioni
B-ANALYST A.MENARINI DIAGNOSTICS	Analizzatore chimica clinica	Valutare la presenza di analiti
AMCOTA NUOVA CRIOTECNICA	Frigorifero +4°C	Conservazione di campioni o reagenti
4226 CENTRIFUGE ALC	Centrifuga per tubi da 10,15 e 50 mL	Centrifugazione di campioni
SANYO ULTRA LOW TEMPERATURE FREEZER	Frigorifero -80°C	Conservazione di campioni
CARON OASIS 1266982	Incubatore CO2	Incubatore di campioni
PRISM R LABNET INTERNATIONAL	Centrifuga per provette da 1,5 mL	Centrifugazione di campioni
BSB 4A GELAIRE INC. BIOMEDICALS	Cappa biologica rischio 2	Lavorazione di campioni a rischio biologico
WILOVERT	Microscopio ottico	Osservazione di cellule
LIEBHERR	Congelatore -20°C	Conservazione di campioni
STARSONIC 06 PBI INTERNATIONAL	Sonicatore	Sonicazione di campioni
FORLAB MT135 CARLO ERBA	Vortex	Miscelare campioni
AUTOLAB METROHM	Potenziostato	Misurare la differenza di potenziale
PRECELLYS EVOLUTION BERTIN TECHNOLOGIES	Omogeneizzatore	Genclis SAS è una CRO che lavora principalmente su campioni difficili da lisare. Lo scopo di questa applicazione è estrarre proteine riconosciute dagli anticorpi IgE da pazienti allergici. La sfida è estrarre le proteine con la migliore qualità possibile. L'omogeneizzatore per tessuti Precellys Evolution estrae proteine di alta qualità in grandi quantità da campioni di cibo secco. Inoltre, la capacità di elaborare 6 provette da 15 ml è un vero vantaggio e consente di risparmiare tempo.

Ubicazione

Nome stanza	Edificio	Piano
13	PL028	seminterrato